您所在的位置:首頁 > 腎內(nèi)科醫(yī)學(xué)進展 > M型PLA2R及其配體和抗體與特發(fā)性膜性腎病研究進展
近年來的研究發(fā)現(xiàn),人腎小球足細胞膜上表達的M型磷脂酶2 受體(M?type phospholipase A2 receptor,M-typePLA2R)是特發(fā)性膜性腎?。╥diopathic membranous nephropathy,IMN)的主要自身抗原,70%~82%的IMN 患者體內(nèi)相應(yīng)的抗磷脂酶2受體抗體(Anti-PLA2R antibody)是其主要自身抗體。
已有的研究證明M 型磷脂酶2 受體與抗磷脂酶2 受體抗體在腎小球足細胞膜上共表達。磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2)家族參與人體內(nèi)多種代謝功能,部分PLA2是PLA2R的天然配體。我們就近年來M型PLA2R及其配體和抗體與特發(fā)性膜性腎病研究進展作一綜述。
一、PLA2及PLA2R介紹
磷脂酶A2 是一組酶系,廣泛存在于人體各組織器官中。包括分泌型磷脂酶A2(secreted PLA2,sPLA2),細胞質(zhì)型磷脂酶A2(cytosolic PLA2,cPLA2)及非鈣依賴型磷脂酶A2(Ca2+?inde pendent PLA2,iPLA2)3 大類。
每一類又包括多種亞型,如sPLA2 包括11 種亞型(IB, IIA, IIC, IID, IIE,IIF, III, V, X, XIIA 及XIIB);cPLA2 包括6 種亞型(IVA,IVB,IVC,IVD,IVE, IVF);而iPLA2 包括9 種亞型(VIA, VIB,PNPLA6, PNPLA7, PNPLA3, PNPLA2, PNPLA4, PNPLA5,PNPLA1)。
各種PLA2均有不同的體內(nèi)分布及功能,但他們都有一個基本的功能,即水解甘油磷脂sn-2 鍵。其中在自體細胞膜水解中以cPLA2 起主要作用。sPLA2 除酶解作用外,還有其他多種效應(yīng),這些效應(yīng)包括細胞增殖、遷移、激素釋放、脂質(zhì)介質(zhì)產(chǎn)生及細胞因子的產(chǎn)生、細胞信號傳導(dǎo)等。這些效應(yīng)是sPLA2 通過與PLA2R 結(jié)合實現(xiàn)的。
PLA2R 包括N 型及M 型。N 型PLA2R 最初是在大鼠腦組織中被發(fā)現(xiàn)的,另一種受體是M型PLA2R,最先是在兔子骨骼肌中被發(fā)現(xiàn)的。從眼鏡蛇毒中分離出來的神經(jīng)性毒素OS2,即一種sPLA2對兩者都具有高親和力。人體腎臟組織中表達M 型PLA2R。M 型PLA2R 結(jié)構(gòu)示意圖如圖1。
M 型PLA2R 屬于C 型外源性凝集素超家族??甘露糖受體家族的一員,是I型跨膜蛋白,包含較長的胞外段、跨膜段及較短的胞內(nèi)段。胞外段包含N 末端的胱氨酸富集部分、II型纖維連接蛋白部分及八個串聯(lián)的C型外源性凝集素樣部分(CRD)。
PLA2R 細胞外結(jié)構(gòu)中結(jié)合sPLA2的關(guān)鍵部位是CRD5[5]。sPLA2中以sPLA2?IB研究得較為深入。sPLA2?IB(因為在胰腺中大量存在)長久以來被認為是一種消化酶。PLA2R 的發(fā)現(xiàn)拓展了我們對sPLA2?IB 的概念。
sPLA2?IB對PLA2R具有高度特異性親和力,除消化功能外,sPLA2?IB與其受體結(jié)合后執(zhí)行多種生物功能,包括細胞增殖、脂肪介質(zhì)的釋放等等。
研究發(fā)現(xiàn)PLA2R敲除的小鼠中內(nèi)毒素休克病情減輕,而PLA2R 在內(nèi)毒素休克進程中的促炎癥介質(zhì)釋放功能起著關(guān)鍵作用。經(jīng)sPLA2-IB 處理后的大鼠腎小球系膜細胞導(dǎo)致sPLA2-IIA 和環(huán)氧化酶-2(COX-2)表達增加,可能原因是sPLA2?IB 與其特異性M 型PLA2R 結(jié)合所致。sPLA2-IB在MMP的產(chǎn)生中也有重要作用。
既往的研究揭示花生四烯酸(arachidonic acid,AA)介導(dǎo)的代謝在調(diào)節(jié)MMP表達及腫瘤擴散中起作用,提示PLA2在產(chǎn)生AA酶過程中也有一席之地。
人纖維肉瘤細胞表達sPLA2 IB, IIA 及V,同時也表達M 型PLA2R,經(jīng)細胞外sPLA2 阻滯劑處理后的腫瘤細胞侵襲性減輕且MMP-2/9 生成減少。
給予纖維肉瘤細胞增加外源性sPLA2?IB可顯著提高MMP?2/9生成。在HT-1080細胞中AA及油酸呈時間依賴性的分泌增加。這一效應(yīng)是受體介導(dǎo)的,而非其脂解效應(yīng)。
二、sPLA2與M型PLA2R間的調(diào)節(jié)機制
I型sPLA2通過特異性PLA2R調(diào)節(jié)前列腺素類物質(zhì)的生物合成而不是其自身的酶解活性,這在成骨細胞中已經(jīng)得到證實。其機制為誘導(dǎo)COX-2 的產(chǎn)生,而后者誘導(dǎo)產(chǎn)生前列腺素(PGE)。
可能是sPLA2 先水解細胞膜產(chǎn)生AA,AA 進入細胞內(nèi),在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核膜周圍有COX?1 及COX-2 存在,后者可作用于AA 而產(chǎn)生PGE。
也有認為sPLA2通過激活cPLA2使其磷酸化后產(chǎn)生酶解活性,水解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜或核膜產(chǎn)生AA,后者再通過COX-1或COX-2途徑產(chǎn)生PGE。肥大細胞中sPLA2-II通過細胞表面受體調(diào)控AA的釋放,導(dǎo)致cPLA2 的激活。其機制可能是激活了包括PKC/Raf-1/MAPK在內(nèi)的信號傳導(dǎo)途徑。
此外,在大鼠纖維細胞中,發(fā)現(xiàn)cPLA2 及其下游的12-或15-脂氧合酶途徑能增強sPLA2?II基因的表達。在人胚胎腎細胞中,細胞因子**產(chǎn)生的cPLA2 導(dǎo)致的AA 使細胞膜失去穩(wěn)態(tài)而使其更容易被sPLA2-II 水解。
本課題組前期研究已證實培養(yǎng)的人足細胞可表達M 型PLA2R,血管緊張素II **后會導(dǎo)致足細胞nephrin 蛋白表達變化及足細胞凋亡。證明了在小鼠足細胞中醛固酮可通過PI3/Akt 及P38MAPK信號通路導(dǎo)致足細胞凋亡。
雖然sPLA2抑制劑如吲哚類似物Indoxam在一些疾病模型中可阻斷sPLA2 與其受體結(jié)合后的效應(yīng)并揭示其潛在的治療效果,但由于將sPLA2 的侵襲性及防御性效應(yīng)均阻斷了,因此在阻止其促炎性反應(yīng)效應(yīng)的同時也抵消了其治療作用。由于sPLA2的水解作用,sPLA2對外來細菌及真菌有殺傷作用。
如sPLA2?IIA 能直接降解細菌胞膜而有效的殺傷細菌,sPLA2?V則能促進巨噬細胞提升其抗真菌效應(yīng)。應(yīng)用sPLA2 阻斷劑于感染性疾病可能促使炎癥擴散。
這也許能解釋sPLA2的阻斷劑LY333013或LY315920NA/S-5920 在過敏導(dǎo)致的支氣管收縮、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及嚴重敗血癥中無效的原因。也許只阻斷sPLA2的侵襲性效應(yīng)而不阻斷其防御性效應(yīng)的阻斷劑更值得期待。
關(guān)于磷脂酶A2 家族已經(jīng)明確的有以下幾點:⑴cPLA2a 是AA 代謝的核心調(diào)節(jié)因子,sPLA2 和iPLA2 也參與了脂質(zhì)介質(zhì)的產(chǎn)生。⑵ iPLA2 家族在細胞膜的平衡及能量代謝中起調(diào)節(jié)作用。⑶ cPLA2 和iPLA2 家族的酶在對基質(zhì)分子的磷脂水解活性方面較sPLA2 更強。
?、萻PLA2在組織微環(huán)境中對細胞外磷脂質(zhì)執(zhí)行其生物功能,包括臨近細胞的胞膜、細胞脫落的微囊泡、脂蛋白和表面活性劑等非細胞來源的脂質(zhì)成分、外源性磷脂如微生物膜以及食物脂肪等。多種多樣的靶目標膜也許能解釋為什么在每種PLA2 家族中有如此多的亞型存在。在真核生物中,PLA2 家族除了產(chǎn)生脂質(zhì)介質(zhì)外,還參與了脂質(zhì)代謝的全過程。
?、?sPLA2與PLA2R結(jié)合的阻滯劑應(yīng)用的效果目前沒有定論,研究不良反應(yīng)更少,正效應(yīng)更強的阻滯劑是今后的研究方向。
三、M 型PLA2R 及抗PLA2R 抗體與特發(fā)性膜性腎病的關(guān)系
自Beck 等發(fā)現(xiàn)抗PLA2R 抗體是IMN 患者體內(nèi)的主要自身抗體以來,圍繞抗PLA2R 抗體是導(dǎo)致IMN 發(fā)生發(fā)展的病因還是伴發(fā)現(xiàn)象仍未有定論。
現(xiàn)已明確在人類足細胞上有M 型PLA2R 表達,并證明M 型PLA2R 與抗PLA2R 抗體共表達。Beck 等的研究發(fā)現(xiàn)抗PLA2R 抗體只在特發(fā)性膜性腎病中表達,而在繼發(fā)性膜性腎病及其他腎小球疾病中并不表達。
且發(fā)現(xiàn)隨著IMN 病情的好轉(zhuǎn),抗PLA2R 抗體滴度降低直至消失。另有研究發(fā)現(xiàn)IMN患者中足細胞上PLA2R表達明顯增高,說明PLA2R在IMN 的發(fā)病中是有改變的,無論這改變是病因還是現(xiàn)象。
在一項前瞻性研究中,組織學(xué)診斷為MN的88例患者腎臟均表達PLA2R,其中61 例高度陽性表達,61 例中有60 例患者血清中表達抗PLA2R 抗體;另27 例患者腎臟較弱表達PLA2R,并且血清中抗PLA2R抗體為陰性,其中15例發(fā)現(xiàn)有繼發(fā)性因素,其余12 例患者沒有發(fā)現(xiàn)繼發(fā)性原因或其他腎小球抗原。
該研究者認為檢測腎小球內(nèi)PLA2R 并判斷其陽性強度有助于提示檢測血清抗PLA2R抗體,有助于鑒別原發(fā)與繼發(fā)性MN。PLA2R 的抗體存在于70%~82%的IMN 患者中,此發(fā)現(xiàn)改變了人們對MN 的認識。
PLA2R 被認為是IMN的自身抗原有以下證據(jù):⑴ 在腎小球上與PLA2R 結(jié)合的抗體在IMN血清中被發(fā)現(xiàn)且具有相同大小。⑵ 所有與從人類腎小球提取來的185 kDa 大小的糖蛋白反應(yīng)的血清樣本能被細胞表達的重組人類PLA2R(rPLA2R)識別。
?、?人腎小球提取的免疫沉淀物能被抗PLA2R 抗體通過Western 印跡檢測。⑷ 重組PLA2R 與腎小球來源的蛋白具有相同的減敏表位。雖然抗PLA2R 抗體在70%以上IMN 患者中被發(fā)現(xiàn)且與病情活動及蛋白尿相關(guān),但目前仍沒有確切的證據(jù)證明這些抗體就是致病原。
第一,PLA2R 相關(guān)性MN 不能通過患者的血清或IgG注入鼠類或兔子中產(chǎn)生,因為這些種屬在腎小球中并不表達PLA2R 抗原。
第二,沒有PLA2R 相關(guān)性MN 動物模型能取代Heymann腎炎,而后者是一種值得信任的MN 動物模型,其目標抗原megalin 表達在足細胞表面。
第三,抗PLA2R 抗體偶爾在上皮下免疫復(fù)合物不含PLA2R 抗原的IMN 中發(fā)現(xiàn),說明至少一些抗PLA2R抗體不是病因。
第四,雖然PLA2R相關(guān)性MN在腎臟移植物中可復(fù)發(fā)。Blosser 等報道了在一例63 歲男性IMN 患者中,腎移植后第6 天就復(fù)發(fā)蛋白尿,移植腎穿刺提示病理類型為IMN。且同時血液中抗PLA2R 抗體陽性。
但Debiec等觀察到有一些高滴度抗PLA2R 抗體的患者在腎移植后并沒有復(fù)發(fā)。需要進一步的研究闡明這些抗體是如何產(chǎn)生的,這些抗體是如何影響足細胞功能的。當(dāng)然,基因遺傳易感性也應(yīng)該被列入研究之中。
目前一些研究也發(fā)現(xiàn)PLA2R基因多態(tài)性在IMN易感性中的可能作用。Stanescu 等統(tǒng)計了556 例IMN 白人相關(guān)資料后發(fā)現(xiàn)位于染色體6p21 上的HLA-DQA1 等位基因與IMN發(fā)病密切相關(guān)。
國內(nèi)也有研究發(fā)現(xiàn)中國漢族人群PLA2R rs 35771982 位點基因多態(tài)性可能與IMN 易感性相關(guān),但是rs 3828323 位點基因多態(tài)性與IMN 卻沒有相關(guān)性。提示rs 35771982位點CC基因型是IMN 的危險因素。
在細胞膜上的結(jié)構(gòu)性細胞內(nèi)吞作用再循環(huán)為足細胞及足突提供了穩(wěn)定來源的PLA2R。目前還不知道抗PLA2R 抗體是否影響足細胞上PLA2R 的正常功能,腎小球上的PLA2R 的生物功能也不清楚。
最近有報道PLA2R 在人纖維細胞上能加重**性細胞衰老,至少部分是因為引起活性氧族(ROS)產(chǎn)生及DNA損傷所致。而在敲除PLA2R 的細胞中減輕了應(yīng)激所致的衰老,細胞衰老得以被阻止。
雖然已被證明MN中有補體的參與,但是IMN 的發(fā)病機理中原發(fā)性事件幾乎與補體激活無關(guān)。在人類自身抗體激活事件中有許多這樣的例子。包括Grave’s 病中甲狀腺**性抗體,子癇前期引起高血壓的激活A(yù)TII受體的抗體及移植腎排異反應(yīng)等。
抗PLA2R抗體可能潛在的影響PLA2R 的正常功能,也許是作為假性激動劑,也許作為受體拮抗劑。由于PLA2R 在足細胞中的作用尚未可知,現(xiàn)在回答此問題為時尚早,但在人纖維細胞中的研究提供了抗PLA2R抗體作為潛在激活劑的可能。
因此,有關(guān)PLA2R 及其自身抗體的許多問題仍待發(fā)現(xiàn)。內(nèi)生性PLA2R 的構(gòu)相表位是如何表達并引起自身抗體反應(yīng)的?PLA2R 及MN 易感性間聯(lián)系的分子特性是什么?
為什么人IMN的自身抗體是IgG4亞型為主?自身抗體與細胞原位抗原結(jié)合后是如何導(dǎo)致腎小球通透性增加的?IMN 中導(dǎo)致足細胞損傷的中間介質(zhì)是什么?IMN中操縱抗原抗體系統(tǒng)反應(yīng)的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)是什么?SMN的發(fā)病機制又是什么?
目前沒有關(guān)于抗PLA2R 抗體、PLA2 及M 型PLA2R 相互影響關(guān)系的足細胞病相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)。如前所述,PLA2 在體內(nèi)介導(dǎo)許多的生物功能。
PLA2 通常被認為是調(diào)控脂類物質(zhì)釋放的關(guān)鍵酶。隨著sPLA2 的逐漸發(fā)現(xiàn)增多及不同的與sPLA2 結(jié)合的膜蛋白的發(fā)現(xiàn),此類酶還起著受體的配體的作用,且他們的生物功能也不僅僅限于催化活性。
有學(xué)者發(fā)現(xiàn)甘油二酯(DAG),即一種內(nèi)生性PKC 激活劑在高糖環(huán)境的細胞中合成增加,可能在糖酰基化中起作用。已有研究報道激活PKC可增加cPLA2活性,可能部分是增加了cPLA2的磷酸化,cPLA2的磷酸化這一步驟是cPLA2 活化的關(guān)鍵。而DAG 增加可激活PKC 通路,從而加強cPLA2 活化。
進一步研究發(fā)現(xiàn),蛋白激酶C(PKCа)及蛋白相互作用C 酶1(PICK1)能與nephrin 結(jié)合。高糖誘導(dǎo)的PKCа上升導(dǎo)致nephrin、PKCа、PICK1 及β抑制蛋白2 形成復(fù)合物,導(dǎo)致足細胞損傷。在PKCа和/或PICK1 敲除的足細胞細胞中,nephrin 及β抑制蛋白2 相互作用減輕,高糖導(dǎo)致的nephrin內(nèi)吞作用消除。
Koya等檢測出DAG-PKC 激活可能是腎小球功能失調(diào)如GFR 增加及蛋白尿的重要細胞內(nèi)機制。在糖尿病腎病大鼠中以d-α-生育酚效應(yīng)為特征,而d-α-生育酚抑制劑可抑制DAG-PKC 信號途徑。
另一種假說認為抗PLA2R 抗體導(dǎo)致ROS產(chǎn)生,繼而p53 被激活,DNA 受損,從而導(dǎo)致足細胞損傷。但只是基于成纖維細胞中的實驗結(jié)果而做出的假說,并未得到實驗的驗證。
總之,在特發(fā)性膜性腎病中,PLA2R 及抗PLA2R 抗體在患者體內(nèi)是變化的,大多數(shù)研究結(jié)果顯示與病情改變呈正相關(guān),但也有相反的結(jié)果報道??筆LA2R 抗體是特發(fā)性膜性腎病的病因還是伴隨現(xiàn)象仍需繼續(xù)探討。
目前確切的抗PLA2R 抗體是否導(dǎo)致足細胞損傷、具體機制如何以及PLA2R 和PLA2 家族在此間所起的作用均未有令人信服的證據(jù),還有許多的待解之謎,值得我們進一步研究探索。
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