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常見腫瘤基因檢測規(guī)范及進展:胃癌HER2

2013-12-26 14:03 閱讀:10025 來源:醫(yī)脈通 責任編輯:李思杰
[導(dǎo)讀] 胃癌是全世界第4大常見癌癥及第2大癌癥致死原因,我國男性及女性胃癌死亡率均高于世界平均水平。2010年中國衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒顯示,2005年胃癌死亡率占我國惡性腫瘤死亡率的第3位。隨著腫瘤生長、增殖等分子機制的明確和分子靶向藥物研究的迅速發(fā)展,尋找可預(yù)測腫

    胃癌是全世界第4大常見癌癥及第2大癌癥致死原因,我國男性及女性胃癌死亡率均高于世界平均水平。2010年中國衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒顯示,2005年胃癌死亡率占我國惡性腫瘤死亡率的第3位。隨著腫瘤生長、增殖等分子機制的明確和分子靶向藥物研究的迅速發(fā)展,尋找可預(yù)測腫瘤治療效果及患者預(yù)后等的分子標志物日趨重要。
 


    一項國際多中心、隨機對照、Ⅲ期臨床研究,即ToGA研究結(jié)果顯示,化療聯(lián)合曲妥珠單抗治療可顯著延長進展期胃癌患者生存期,基于這一結(jié)果,2010年歐洲藥品管理局(EMA)及美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)先后批準化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療人表皮生長因子受體2(HER2)陽性胃及胃食管交界處癌(以下簡稱胃癌)患者,我國衛(wèi)生和計劃生育委員會(以下簡稱衛(wèi)生計生委)發(fā)布的《胃癌診療規(guī)范(2011年版)》規(guī)定,對HER2陽性的晚期胃癌患者,可考慮在化療基礎(chǔ)上,聯(lián)合使用分子靶向治療藥物曲妥珠單抗。由此可見,組織標本的病理檢測報告還應(yīng)提供HER2檢測結(jié)果,檢測準確性是胃癌HER2靶向治療患者篩選和療效預(yù)測的前提。

    1、胃癌和乳腺癌中HER2檢測方法的比較

    胃癌中HER2檢測的標本制作過程、染色方法及檢測試劑和乳腺癌是相同的,判斷方法也大致和乳腺癌使用的標準相同,但需要注意以下幾點。

    第一,乳腺癌HER2表達是依據(jù)美國臨床腫瘤學(xué)會/美國病理學(xué)家學(xué)會(ASCO/CAP)指南規(guī)定的標準進行判讀,而胃癌則是依據(jù)該指南之前的乳腺癌判讀標準(FDA標準)進行判斷,采用10%的截斷值。

    第二,胃癌和乳腺癌HER2表達模式不同(圖1),乳腺癌中過度表達的Her-2蛋白定位于完整的細胞膜,而胃癌中,主要在癌細胞側(cè)面膜或底側(cè)膜(即U型)表達,腔面膜可不表達。
 


    第三,由于胃癌的腫瘤異質(zhì)性較乳腺癌更常見,胃癌的內(nèi)鏡活檢標本的判讀標準取消了細胞陽性百分比的截斷值,只是手術(shù)標本采用10%的截斷值標準,而乳腺癌穿刺活檢標本的判斷標準與手術(shù)標本相同。

    第四,胃癌主張首先使用免疫組織化學(xué)染色(IHC)方法進行檢測,而乳腺癌沒有強調(diào)IHC或熒光原位雜交方法(FISH或雙色銀增強原位雜交,DSISH)哪種先行,因此,需要建立符合胃癌特性的HER2檢測流程和判讀標準。

    2、HER2檢測流程


    作為篩選HER2分子靶向治療適應(yīng)癥的初次檢測,建議首先使用IHC方法,這是因為胃癌本身的異質(zhì)性及腫瘤內(nèi)HER2表達的異質(zhì)性都很強,IHC較FISH(或DSISH)更易掌握腫瘤總體情況。當判斷結(jié)果為2+時,須FISH(或DSISH)重新檢測。將判斷為3+或2+/FISH(或DSISH)陽性[HER2/17號染色體拷貝數(shù)(CEP17)≥2.0]的病例作為曲妥珠單抗治療對象(圖2)。
 


    3、HER2檢測樣本的制備和選擇

    檢測標本可選用腫瘤原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶的手術(shù)切除及活檢標本,內(nèi)鏡取活檢標本時應(yīng)避開潰瘍底等肉芽組織和壞死組織,分別在腫瘤的不同處鉗取較通常情況稍微多的組織(如果可能取6~8塊),在可能的情況下用放大內(nèi)鏡觀察,判斷**狀癌或高中分化管狀腺癌,以便有的放矢地取活檢。

    對于難以得到新生癌組織的復(fù)發(fā)性胃癌,可檢測既往手術(shù)或活檢時的原發(fā)灶組織蠟塊,不宜使用保存6周以上的未染色切片;由具有認證資質(zhì)的病理科醫(yī)生通過既往HE染色結(jié)果篩選癌組織,尤其是高-中分化腺癌的組織蠟塊,并與癌周組織同時切片待用。

    IHC及FISH(或DSISH)的最適組織厚度均為3~4μm,盡可能選擇IHC染色陽性部分進行檢測;由于組織固定條件不同,未必所有標本都適合做FISH(或DSISH)檢測。

    手術(shù)切除標本離體后應(yīng)在20~30分鐘內(nèi)進行切開、固定,活檢組織應(yīng)立即固定,固定液宜選用10%中性福爾馬林,體積應(yīng)為組織體積的10倍,不宜用微波快速固定組織。

    手術(shù)切除標本固定時間以6~48小時為宜,而活檢標本根據(jù)樣本大小而定(固定液浸透效力為1mm/hr);應(yīng)注意固定充分和脫水徹底,石蠟熔點≤60°C,避免長時間置于融化石蠟中。

    4、HER2檢測結(jié)果的判讀


    IHC判讀標準陽性結(jié)果判斷根據(jù)細胞膜U型著色及染色強度進行,判斷手術(shù)標本選用10%截斷值(著色腫瘤細胞>10%為陽性);內(nèi)鏡活檢標本判斷不用設(shè)定細胞陽性比例截斷值,確認5個以上成簇的陽性癌細胞即可判斷HER2陽性。

    染色強度的評價常具有主觀性,羅斯考夫(Rüschoff)等建議在不同顯微鏡放大倍數(shù)下評價細胞膜著色強度。低倍鏡(×2.5或×5)下膜染色清晰可見,為3+;中倍鏡(×10或×20)下膜染色較明顯,為2+;高倍鏡(×40)下膜染色隱約可見,為1+;細胞核著色的細胞不做評價,或建議FISH(或DSISH)檢測(圖3)。
 


    FISH或DSISH判讀標準對臨界病例或“疑難”病例,應(yīng)行FISH或DSISH驗證,因DSISH與FISH方法相比,具有符合率高、成本低、標本可長期保存、明場下可觀察形態(tài)、可自動化染色等特點,目前被國內(nèi)外許多檢測機構(gòu)采用。2011年中華醫(yī)學(xué)會《胃癌HER2檢測指南》中推薦使用IHC結(jié)合FISH或DSISH檢測。

    判讀方法及標準為計數(shù)至少20個腫瘤細胞核中HER2基因拷貝數(shù)與CEP17的比值。

    結(jié)果判斷標準為:①HER2信號總數(shù)與CEP17信號總數(shù)比值≥2.2,為HER2基因擴增;②兩信號比值<1.8,為無基因擴增;③比值介于1.8~2.2之間要再計數(shù)20個細胞核中信號或更換分析人員重新計數(shù)。

    如果計數(shù)40個癌細胞,比值>2.0判讀為陽性,比值<2.0則為陰性。在檢測報告中應(yīng)注明兩信號的平均值,如果每個腫瘤細胞CEP17信號≥3,則定義為17號染色體多倍體,也應(yīng)注明。

    5、HER2檢測的質(zhì)量控制

    在此,我們建議由經(jīng)培訓(xùn)并獲資格認證的病理醫(yī)生分析胃癌HER2檢測結(jié)果,所有檢測實驗室須采用經(jīng)認證的流程進行管理,除內(nèi)部質(zhì)控計劃外,還應(yīng)積極參與外部質(zhì)控來驗證檢測能力。胃癌HER2檢測的外部質(zhì)控由英國外部質(zhì)量評估中心、北歐國家免疫組織化學(xué)質(zhì)量控制和我國衛(wèi)生計生委病理質(zhì)控評價中心等進行。

    隨著胃癌分子生物學(xué)研究的不斷進展,靶向治療已成為胃癌個體化治療的重點,規(guī)范化的診斷可以幫助胃癌患者及早地確診疾病,開展個體化治療;美國**綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)中國版《胃癌臨床實踐指南2011年第1版》已明確規(guī)定,對于擬采用曲妥珠單抗進行治療的胃癌患者,需要進行IHC和(或)FISH(或其他原位雜交方法)檢測HER2表達狀況,胃癌HER2檢測的規(guī)范化和標準化有助于提高胃癌個體化治療的效率。

    2013年胃癌HER2相關(guān)鏈接(按照時間順序)
    Ann Surg Oncol:晚期胃癌S-1輔助化療依從性關(guān)鍵保持體重
    中國腫瘤發(fā)病率年增長5% 青壯年胃癌翻倍
    HER2是胃癌患者是否接受放化療的評價指標
    抗腸癌和胃癌 的 "黑馬"白細胞介素-11
    胃癌外科治療新進展
    2013年CSCO學(xué)術(shù)年會:胃癌化療最新研究解讀
    胃癌的循環(huán)腫瘤細胞檢測與靶向治療進展
    胃上皮細胞特異性的PTEN缺失促成了胃癌的形成
    胃癌新輔助化療研究的設(shè)計最重要的關(guān)鍵因素
    國內(nèi)研究進展:胃癌又一靶點預(yù)示不良預(yù)后
    專家解讀:早期胃癌ESD治療難點

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    常見腫瘤基因檢測規(guī)范及進展:胃癌HER2
    常見腫瘤基因檢測規(guī)范及進展:肺癌EGFR
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