研究發(fā)現(xiàn)，全球99%以上的宮頸癌病例都是由人**瘤病毒（HPV）所引起，宮頸癌是目前唯一病因明確、可早期預(yù)防和治療、并可實現(xiàn)治愈的惡性腫瘤。然而，HPV感染相當(dāng)常見，大多數(shù)是一過性感染，會被人體自身免疫系統(tǒng)清除。只有長期持續(xù)感染高危型HPV病毒才會導(dǎo)致高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN），進(jìn)而發(fā)展為宮頸癌。由此，宮頸癌防止的關(guān)鍵在于篩查出高風(fēng)險人群，找出高級別CIN患者，及時干預(yù)。除了制定符合我國國情的科學(xué)、有效的宮頸癌篩查策略，錯誤診斷和過度診斷也是目前宮頸癌防止工作中亟待解決的問題之一。采用免疫組化雙染技術(shù)在宮頸上皮細(xì)胞或組織中檢測兩種生物標(biāo)志物p16和Ki-67以輔助診斷宮頸癌前病變已成為當(dāng)前各國研究的重點，通過新檢測、新技術(shù)的臨床應(yīng)用以實現(xiàn)宮頸癌篩查益處最大化，同時減少和避免由錯誤診斷和過度診斷帶來的不必要的資源浪費和潛在危害。

　　日前，在中華醫(yī)學(xué)會第十四屆全國細(xì)胞病理學(xué)會議暨細(xì)胞病理學(xué)讀片會上，中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科主任余俐教授同與會病理及腫瘤領(lǐng)域的專家深入交流并探討了CINtec®　PLUS p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測對于輔助宮頸癌前病變診斷的重要性。

　　p16/Ki-67雙染檢測輔助細(xì)胞學(xué)診斷 有效降低**鏡轉(zhuǎn)診率

　　盡管細(xì)胞學(xué)在很多國家是標(biāo)準(zhǔn)的宮頸癌篩查方法，但在臨床實際操作中，存在諸多問題：由于其敏感性較低，重復(fù)性差，檢測結(jié)果存在一定的假陰性率和假陽性率；針對無明確意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASC-US），不能明確是癌前病變還是反應(yīng)性細(xì)胞改變；實驗室間的結(jié)果差異大；對腺癌不敏感；篩查間隔頻繁，至少每2-3年就要進(jìn)行一次檢測。一項入組4,948份液基細(xì)胞學(xué)玻片的宮頸細(xì)胞學(xué)檢查重復(fù)性的研究發(fā)現(xiàn)，ASC-US的診斷符合率為43%，即57%的患者被錯誤診斷，而對于高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL），符合率僅為47%，53%的患者被錯誤診斷。

　　余俐教授指出：“宮頸癌篩查的目的是找出CIN2+病變。較為理想的宮頸癌篩查手段應(yīng)該是在提高細(xì)胞學(xué)檢測敏感性的同時，能夠不損失其特異性，或者可以通過客觀的生物標(biāo)志物，標(biāo)記出高級別病變的細(xì)胞，以輔助細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果的判讀和診斷。”

　　2012年，美國病理學(xué)家協(xié)會（CAP）和美國**鏡和宮頸病理學(xué)會（ASCCP）聯(lián)合發(fā)布了下生殖道HPV相關(guān)的鱗狀病變的命名標(biāo)準(zhǔn)化計劃（LAST）指南，最終認(rèn)定p16是唯一有足夠的臨床研究數(shù)據(jù)證實其可用于宮頸癌前病變診斷的生物標(biāo)志物。

　　p16是在人染色體9p21中發(fā)現(xiàn)的第一個直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因。對于正常細(xì)胞的HPV一過性感染，免疫組化檢測不能檢測到p16表達(dá)；而在HPV轉(zhuǎn)化性感染后，抑癌基因失活，導(dǎo)致致癌基因E6和E7過表達(dá)，細(xì)胞無限制增殖，從而引起p16的過度表達(dá)，并被免疫組化檢測到。因此，p16可作為HPV感染的間接標(biāo)志物，廣泛應(yīng)用于宮頸癌前病變診斷。

LAST指南推薦了四種需要應(yīng)用p16的情況：對CIN2、CIN3 和諸如萎縮、不成熟鱗化、修復(fù)性改變及錐切術(shù)后等的其他病變進(jìn)行鑒別診斷時；無論什么情況下，病理學(xué)家在考慮到CIN2診斷時；當(dāng)病理學(xué)家之間的診斷意見不一致時；當(dāng)細(xì)胞學(xué)判讀結(jié)果和組織學(xué)不一致，即活檢標(biāo)本被診斷為CIN1及以下病變，而細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果為HSIL、非典型鱗狀細(xì)胞（ASC-H）、非典型腺細(xì)胞不能明確意義（AGC(NOS)）、或ASC-US/HPV16 (+)時，推薦使用p16 免疫組化檢測作為一種輔助的形態(tài)學(xué)評估指標(biāo)。

LAST指南建議使用特定克隆號（E6H4）的 p16INK4a抗體作為檢測HPV感染是否影響到細(xì)胞周期調(diào)控的生物標(biāo)志物，該克隆號是全球唯一獲得IVD認(rèn)證的p16INK4a抗體。2015年11月26日，國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)羅氏診斷CINtec®PLUS細(xì)胞學(xué)試劑盒（抗p16（E6H4）/Ki-67（274- 11 AC3）單克隆抗體雞尾酒試劑（免疫細(xì)胞化學(xué)法））用于宮頸脫落細(xì)胞學(xué)的診斷。

　　p16在細(xì)胞周期的阻滯期具有抑制細(xì)胞增殖的功能，而另一種生物標(biāo)志物Ki-67則指示細(xì)胞增殖。因此，在同一個細(xì)胞周期，生理機(jī)能正常細(xì)胞中不可能同時表達(dá)p16與Ki-67，如二者同時表達(dá)，則提示細(xì)胞周期失調(diào)。CINtec®PLUS細(xì)胞學(xué)雙染檢測能夠同時檢測出HPV持續(xù)感染后過表達(dá)的p16和Ki-67，經(jīng)過染色，p16核呈棕黃色或胞漿與核均呈棕黃色，Ki-67核呈紅色染色。如雙染陽性，強(qiáng)烈提示CIN2+病變，需立即進(jìn)行**鏡檢查；如雙染陰性，可隨訪一年后復(fù)查。CINtec®PLUS細(xì)胞學(xué)檢測可以幫助醫(yī)生客觀地判斷哪些人群需要做進(jìn)一步的**鏡檢查，顯著降低了**鏡轉(zhuǎn)診率，減少患者不必要的檢查與治療。

　　2015年Besthesda（The Besthesda System for Reporting Cervical Cytology）指南推薦免疫細(xì)胞化學(xué)可輔助細(xì)胞學(xué)診斷。指南指出，在檢出HSIL病變中，p16/Ki-67雙染與細(xì)胞學(xué)檢測的特異性相當(dāng)，且具有高敏感性。同時，在使用的報告模板方面，指南推薦在細(xì)胞學(xué)報告中加入免疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)果，并寫出臨床意義。

　　余俐教授表示：“CINtec®PLUS檢測基于客觀的生物標(biāo)志物表達(dá)，能更準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)潛在的高級別病變患者，提高宮頸癌前病變檢出率，彌補(bǔ)了現(xiàn)有宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢測的不足，降低漏診率，減少過度診斷，同時也為細(xì)胞病理醫(yī)生減輕了工作強(qiáng)度。” 

　　研究證實CINtec®PLUS雙染檢測靈敏度與特異性高

　　美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）注冊的美國本土最大型的前瞻性宮頸癌篩查臨床試驗ATHENA研究，入組47,208名受試者，進(jìn)行了基于cobas HPV初篩策略和以細(xì)胞學(xué)為基礎(chǔ)篩查策略的三年隨訪試驗。結(jié)果顯示，針對HPV16/18以外的12種高危型HPV陽性患者，比較巴氏涂片細(xì)胞學(xué)與CINtec®PLUS檢測評估三年內(nèi)進(jìn)展為CIN3+風(fēng)險時發(fā)現(xiàn)：CINtec®PLUS檢測能夠得到簡單、客觀的結(jié)果，明確提示患者風(fēng)險以及是否需轉(zhuǎn)診**鏡。CINtec®PLUS陽性患者在3年內(nèi)進(jìn)展為CIN3+病變的風(fēng)險遠(yuǎn)高于細(xì)胞學(xué)ASCUS以上的患者，具有更好的陽性預(yù)測值，需要轉(zhuǎn)診**鏡以減少漏診。CINtec®PLUS陰性的患者，3年內(nèi)發(fā)生CIN3+病變的風(fēng)險低于細(xì)胞學(xué)NILM的患者，具有更好的陰性預(yù)測值，不需要轉(zhuǎn)診**鏡，幫助減少過度治療。

　　前瞻性PALMS（Primary ASCUS LSIL Marker Study）研究入組來自5個歐洲國家的27,349個病例。大量臨床數(shù)據(jù)顯示，CINtec®PLUS雙染檢測具有高靈敏度與高特異性（以CIN2+為終點），可用于ASC-US分流（靈敏度92%-94%，特異性78-81%）、LSIL分流（靈敏度86%-94%，特異性51%-73%），HPV初篩后對高危型HPV陽性者分流（靈敏度74%-88%，特異性75%-83%），對細(xì)胞學(xué)陰性但高危型HPV陽性患者進(jìn)行分流（靈敏度82%-92%，特異性79%-82%）。

　　該研究2015年發(fā)表在《癌癥細(xì)胞病理學(xué)》（Cancer Cytopathology）的最新數(shù)據(jù)顯示：對于細(xì)胞學(xué)ASC-US患者的分流中，CINtec®PLUS檢測和HC2 HPV檢測的**鏡轉(zhuǎn)診率分別為26%與42%；對于細(xì)胞學(xué)LSIL患者的分流中，**鏡轉(zhuǎn)診率分別為53%與84%。證實使用CINtec® PLUS檢測能夠顯著降低**鏡轉(zhuǎn)診率，減少不必要的**鏡轉(zhuǎn)診，避免過度診斷，同時能夠幫助臨床醫(yī)生對患者進(jìn)行精準(zhǔn)分層管理，進(jìn)而實現(xiàn)早期干預(yù)。