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用分子檢驗(yàn)識(shí)別急性移植排異反應(yīng)

2015-03-13 18:21 閱讀:1535 來(lái)源:檢驗(yàn)視界網(wǎng) 作者:學(xué)**涯 責(zé)任編輯:學(xué)海無(wú)涯
[導(dǎo)讀] 腎移植的急性排異(AR)增大了移植腎慢性損傷和衰竭的風(fēng)險(xiǎn),所以急需無(wú)創(chuàng)分子測(cè)定來(lái)改進(jìn)疾病診斷和病人監(jiān)護(hù)。

    腎移植的急性排異(AR)增大了移植腎慢性損傷和衰竭的風(fēng)險(xiǎn),所以急需無(wú)創(chuàng)分子測(cè)定來(lái)改進(jìn)疾病診斷和病人監(jiān)護(hù)。


    BioMark HD和EP1平臺(tái)擁有數(shù)字陣列集成流控電路,可實(shí)現(xiàn)定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)盡管用了免疫抑制療法,大約15%到20%的腎移植患者仍會(huì)發(fā)生急性排異,血清肌酐是腎功能的標(biāo)記物,它水平的升高往往預(yù)示著排異,然后進(jìn)行腎活組織檢查,確認(rèn)是否發(fā)生了排異。

    美國(guó)加利福尼亞大學(xué)舊金山分校的科學(xué)家與來(lái)自多國(guó)的科學(xué)家合作,在2005年至2012年間收集了美國(guó)、墨西哥和西班牙的八座腎移植中心438名成人和兒童腎移植患者的558份外周血樣本,以開發(fā)定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢驗(yàn)產(chǎn)品。他們用急性排異或無(wú)急性排異(由腎活組織檢查確定)成人的143份樣本開發(fā)了這種檢驗(yàn)產(chǎn)品,然后用三組患者完成并確證該檢驗(yàn)產(chǎn)品。

    用基于柱方法的試劑盒提取總核糖核酸(RNA),在安捷倫科技公司(Santa Clara, CA, USA)的2100生物分析儀上用RNA 6000納米芯片實(shí)驗(yàn)室試劑盒測(cè)量RNA完整度。在96.96動(dòng)態(tài)陣列和芯片上執(zhí)行微流控qPCR,通過(guò)HX IFC控制器預(yù)先加載該芯片并在Fluidigm公司(South San Francisco, CA, USA)的BioMark qPCR平臺(tái)上執(zhí)行qPCR.

    科研小組評(píng)估了43個(gè)基因中10個(gè)基因的差異表達(dá),選擇已確證的同樣10個(gè)基因作為標(biāo)記物,用標(biāo)準(zhǔn)化的臨床實(shí)驗(yàn)樣本收集和處理程序診斷外周血中急性排異的。為了提高143份成人樣本的急性排異診斷準(zhǔn)確度,用多種統(tǒng)計(jì)建模方法又找到7個(gè)基因,提高了基因組合鑒別急性排異與非急性排異樣本的準(zhǔn)確度,所以最終的選擇是17個(gè)基因。該測(cè)定名為kSORT,能區(qū)分急性排異風(fēng)險(xiǎn)高和風(fēng)險(xiǎn)低的患者。無(wú)論任何年齡、移植后經(jīng)過(guò)的時(shí)間以及樣本源,kSORT測(cè)定都能夠檢測(cè)血液中的急性排異,無(wú)需額外的數(shù)據(jù)歸一化。

    該研究的論文發(fā)表于2014年11月11日的《公共科學(xué)圖書館》雜志《醫(yī)學(xué)》分冊(cè)上。作者總結(jié)說(shuō),kSORT測(cè)定是一種簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、可用于臨床的血液檢驗(yàn)。他們正在用 kSORT進(jìn)行一項(xiàng)前瞻性觀察實(shí)驗(yàn)以及另一項(xiàng)前瞻性隨機(jī)雙盲臨床干預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定移植后如何繼續(xù)應(yīng)用kSORT,輔助現(xiàn)有的臨床規(guī)程指南分類病人的免疫風(fēng)險(xiǎn)、藥物載荷和活檢要求。


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