重組酶聚合酶擴(kuò)增RPA被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。RPA擴(kuò)增的速度非常快，靈敏度高，對硬件設(shè)備要求低，而且不需要復(fù)雜的樣本處理。這樣的技術(shù)特別適合于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

    在艾滋病診治中，即時檢測是非常重要的，對嬰兒來說更是如此。有案例顯示，艾滋病毒（HIV）感染后立刻進(jìn)行治療就能控制住患者體內(nèi)的病毒，讓它們無法進(jìn)行**。舉例來說，生來就攜帶HIV的密西西比嬰兒，在出生后立即得到了治療。后來這個孩子停藥了兩年多，病毒**依然得到了控制。

    目前嬰兒艾滋病診斷的金標(biāo)方法是DNA PCR,但許多地區(qū)并不具備這樣的條件。在這種條件下，RPA技術(shù)正好可以大展身手。

    紙做的HIV DNA檢測裝置

    2012年九月，研究人員開發(fā)了一個由紙、玻璃纖維和塑料制成的裝置，用來對HIV的DNA進(jìn)行RPA擴(kuò)增。這個裝置成本低、小巧輕便、而且易于使用，只需五步就能搞定HIV檢測。擴(kuò)增結(jié)果可以通過側(cè)流層析試紙來讀取。

    人們可以先從嬰兒的干血斑樣本中提取DNA,然后再進(jìn)行RPA擴(kuò)增。研究顯示，用這個裝置進(jìn)行RPA擴(kuò)增反應(yīng)，能在十五分鐘內(nèi)將10拷貝的HIV DNA擴(kuò)增到可檢出的水平。可見，這是一個前景廣闊的低成本即時檢測裝置。（文獻(xiàn)：A paper & plastic device to perform recombinase polymerase amplification of HIV DNA, Lab on a Chip）

    RPA檢測HIV DNA的實戰(zhàn)效果

    如果不能及時檢測嬰兒體內(nèi)的HIV-1,就會延誤治療并影響治療效果。2013年的一項研究設(shè)計了靶標(biāo)HIV-1基因組不同區(qū)域（長末端重復(fù)LTR和pol）的兩種探針。研究人員用這兩個探針分別進(jìn)行RPA擴(kuò)增，然后進(jìn)行熒光檢測和側(cè)流層析試紙檢測。研究表明，這樣的方法能夠可靠地檢測到3拷貝的前病毒DNA.研究人員在此基礎(chǔ)上測試了多個HIV-1突變株，pol和LTR引物的擴(kuò)增率分別為98.6%和93%.

    這是一個能檢測出HIV-1所有主要亞型的等溫擴(kuò)增法，能夠在資源匱乏的地區(qū)幫助人們診斷攜帶被HIV感染的嬰兒。（文獻(xiàn)：Rapid detection of HIV-1 proviral DNA for early infant diagnosis using recombinase polymerase amplification, MBio.）

    HIV DNA的實時定量檢測

    今年五月，研究人員使用內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過RPA擴(kuò)增定量了HIV-1 DNA的濃度。這是一種基于實時熒光數(shù)據(jù)的定量RPA技術(shù)，被稱為qRPA.

    這項研究通過一系列試驗，分析和定量了不同濃度的HIV-1 DNA樣本。研究顯示，在所有測試的濃度范圍內(nèi)，qRPA的預(yù)測值與正確值在一個數(shù)量級以內(nèi)?？梢?，定量RPA（TwistAmp exo）可以作為核酸定量的有力工具，用于即時檢測和體外診斷。（文獻(xiàn)：Quantification of HIV-1 DNA using Real-Time Recombinase Polymerase Amplification, Analytical Chemistry）

    不插電的HIV DNA檢測

    絕大多數(shù)核酸擴(kuò)增（包括等溫擴(kuò)增）都需要電。但在資源匱乏的區(qū)域，最好是有不需要持續(xù)供電的診斷工具。RPA的工作溫度在25-43°C之間，不需要嚴(yán)格控制孵育溫度，就能達(dá)到理想的性能。

    今年九月的一項研究顯示，當(dāng)室溫在31°C - 43°C之間時，孵育20分鐘RPA反應(yīng)就能成功進(jìn)行，檢測到10拷貝的HIV-1前病毒DNA.

    當(dāng)室溫降到30°C以下時，RPA的擴(kuò)增性能有所下降。為此，研究人員開發(fā)了一個簡單的化學(xué)加熱器，在室溫10-30°C時孵育HIV-1 RPA反應(yīng)。研究顯示，RPA的性能通過加熱孵育得到了恢復(fù)，能檢測到10拷貝的HIV-1前病毒DNA.

    研究人員在15°C、20°C、25°C和30°C,用這種加熱器進(jìn)行了12個RPA反應(yīng)，結(jié)果全部擴(kuò)增成功。他們還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度較低時，孵育30分鐘能促進(jìn)RPA的擴(kuò)增性能。研究表明，對RPA HIV-1反應(yīng)進(jìn)行化學(xué)加熱，與電力設(shè)備效果差不多。這也說明，RPA HIV-1檢測不需要多好的設(shè)備，就可以實現(xiàn)高靈敏度的診斷。