ELISA實驗操作所要求的條件是比較嚴(yán)格的，無論是對實驗的硬件條件還是對實驗的操作人員的技術(shù)要求，都是如此。下面所提到的就是一些在進行ELISA實驗時所要注意的一些問題。

    ELISA實驗通用規(guī)則

    1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%.可用水和電子天平進行確定。但最好有專業(yè)人員進行矯正。

    2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。

    3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

    4、實驗時，要使底物避光保存。

    5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

    6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

    7、將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

    8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。

    9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

    10、洗板時，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。

    11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

    12、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

    13、檢測前，要打開酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

    14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

    15、待檢樣品要澄清，否則會影響結(jié)果。

    16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。

    17、應(yīng)盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

    18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。